Liraglutid tozu CAS 204656-20-2

Liraglutid tozu, Moleküler Formül C172H265N43O51, CAS 204656-20-2, moleküler ağırlık 1209.40. Doğal GLP-1'e kıyasla% 97'den fazla sekans benzerliğine sahip Peptit-1 (GLP-1) analogu gibi yapay olarak sentezlenmiş bir asillenmiş insan glukagonudur. Su, etanol ve propilen glikol içinde çözülebilir. Doğal GLP-1 molekülünün 34. lizin pozisyonu, sadece asilasyon ürünleri ve proteinler arasındaki bağlanma süresini koruyan ve uzatan, aynı zamanda GLP'nin kolay bozulmasının dezavantajını önemli ölçüde aşan arginin yerini alır. Normal depolama koşulları altında iyi stabilite sergiler ve sulu çözeltisi en az 2 yıl boyunca fiziksel ve kimyasal stabiliteyi koruyabilir.

Genetik toksisite: Ames testinin sonuçlarıLiraglutid tozu, insan periferik kan lenfositleri için kromozomal sapma testi ve sıçan mikronükleus testi negatifti.

Üreme toksisitesi:

1. Erkek sıçanlar, çiftleşmeden 4 hafta önce ve çiftleşme sırasında 0.1, 0.25 ve 1.0mg/kg/d liraglutid ile enjekte edildi. 1.0mg/kg/gün dozda, erkek hayvan doğurganlığı doğrudan etkilenmedi. Plazma AUC hesaplamalarına göre, bu doz tarafından üretilen sistemik maruziyet, önerilen maksimum insan dozunda (MRHD) insan maruziyetinin yaklaşık 11 katı idi. Dişi sıçanlara 1.0 mg/kg subkütan enjeksiyonu, erken embriyonik ölüm, görünür kilo alımı ve gıda alımının azalmasına neden oldu.

2. Çiftleşmeden 2 hafta sonra dişi sıçanlarda hamileliğin 17. gününe kadar, 0.1, 0.25 ve 1.0 mg/kg/d liraglutid subkütan enjeksiyonları uygulandı. Plazma AUC hesaplamalarına göre, bu üç doz tarafından üretilen sistemik maruziyet, MRHD altında insan maruziyetinin sırasıyla yaklaşık 0.8, 3 ve 11 katı idi. 1 mg/kg/d doz grubunda, erken embriyonik ölümlerin sayısında hafif bir artış vardı. Tüm dozlarda, fetal anormallikler, renal ve vasküler varyasyonlar, kafatasının düzensiz kemikleşmesi ve aşırı bir aşırı kemikleşme durumu gözlendi. 1.0 mg/kg/gün dozda benekli karaciğer ve hafif kaburga bükümü gözlendi. Aynı dönemi aşan ve tarihsel kontrolü aşan fetal malformasyonların insidansı: 01mg/kg/d'lik bir dozda boğaz açılışında orofaringeal malformasyonlar ve/veya stenoz ve 0.1 ve 0.25mg/kg/gün dozlarında göbek kusurları.

Hamileliğin 6. ila 18. gününde, tavşanlara 0.01, 0.025 ve 0.05mg/kg/gün konsantrasyonlarında liraglutid ile enjekte edildi. Plazma AUC hesaplamalarına göre, hamile tavşanların sistemik maruziyeti MRHD sırasında insanlardan daha düşüktü. Tüm dozlarda, fetal ağırlık azaldı ve ciddi fetal anormallik insidansı doza bağlı bir şekilde arttı. 0.01mg/kg/d (böbrek, omuz ve dalak kemikleri), 0.01mg/kg/gün (gözler ve ön ayaklar), 0.025mg/kg/gün (beyin, kuyruk ve omur), büyük kan damarları ve kalp, kalbe, otobural kordondan daha büyük veya eşit veya eşit dozlarda, daha büyük veya daha büyük ve eşit veya daha büyük dozlarda 0.05mg/kg/d (parietal kemik ve büyük kan damarları), malformasyonların insidansı çağdaş ve tarihsel kontrollerinkini aştı. Düzensiz kemikleşme ve/veya iskelet anormallikleri kafatası ve yaka, omurlar ve kaburgalar, sternum, pelvis, koksiks ve omuz ve dalak kemiklerinde bulunur; Ayrıca hafif bir doza bağlı iskelet varyasyonu görünür. Viseral anormallikler kan damarları, akciğerler, karaciğer ve yemek borusunda bulunur. Tüm tedavi grupları safra kesesinin çift lobları veya çatalları gösterdi, ancak kontrol grubunda benzer bir durum gözlenmedi.

4. Hamileliğin 6. gününden sütten kesmeye veya 24. günde emzirmenin sonlandırılmasına kadar, dişi sıçanlara subkutan olarak 0.1, 0.25 ve 1.0 mg/kg/d liraglutid ile enjekte edildi. Plazma AUC hesaplamalarına göre, sistemik maruziyet MRHD sırasında insan maruziyetinin yaklaşık 0.8, 3 ve 11 katı idi. Tedavi grubundaki çoğu hayvanın doğum süresi biraz gecikti. Tedavi grubundaki yenidoğanların ortalama ağırlığı kontrol grubundakinden daha düşüktü. 1.0mg/kg/d doz grubundaki dişi sıçanlar, doğum sırasında kan kaybı ve heyecan davranışı sergiledi. Doğumdan doğumdan sonraki 14 güne kadar tedavi grubundaki F2 yavru sıçanlarının ortalama vücut ağırlığı kontrol grubundan daha düşüktü, ancak gruplar arasındaki farklar istatistiksel olarak anlamlı değildi.

Liraglutid tozudoğal GLP-1'e kıyasla% 97'den fazla sekans benzerliğine sahip Peptit-1 (GLP-1) analogu gibi yapay olarak sentezlenmiş bir asillenmiş insan glukagonudur. Liraglutidin moleküler yapısı aşağıdaki ana özellikleri içerir: Doğal GLP-1 molekülünün 34. lizin pozisyonu, sadece asilasyon ürünleri ve proteinler arasındaki bağlanma süresini koruyan ve uzatan, aynı zamanda GLP'nin kolay degradasyonunun dezavantajını önemli ölçüde aşan arginin değiştirilir; 26. lizin için ilave bir yağ asidi yan zinciri ilave edildi, bu da in vivo asilasyon ürünlerinin yarı ömrünü uzatmaya yardımcı oldu. Bu eşsiz moleküler değişiklikler, delilaglutidin klinik tedavide, özellikle diyabet ve kilo kaybında olağanüstü etkiler göstermiştir.

Liraglutid'i sentezlemek için kimyasal yöntemler esas olarak aşağıdaki adımları içerir:

1. Parça sentezi

İlk olarak, tüm liraglutidin genellikle beş segmente bölünebilen birkaç segmente bölün: 1. ila 4. amino asitler, 5. ila 10. amino asitler, 11. ila 16. amino asitler, 17. ila 24. amino asitler ve 25. ila 31. amino asitler. Her fragman ayrı ayrı sentezlenir, bu da peptit sentezinin zorluğunu ve maliyetini azaltabilir ve sentez verimliliğini artırabilir.

Her fragmanın sentezi için, katı faz sentezi veya sıvı faz sentez yöntemleri genellikle kullanılır. Katı faz sentez yöntemi, amino asitlerin karboksil gruplarının reçineye bağlanmasını, daha sonra amino asitleri sırayla sırayla eklemeyi ve son olarak reçineden peptitlerin kesilmesini içerir. Sıvı faz sentez yöntemi, tüm amino asitlerin organik bir çözücü içinde çözülmesini ve daha sonra peptit fragmanları oluşturmak için sırayla yoğunlaşmasını içerir.

2. Birleştirme reaksiyonu

Tam bir liraglutid oluşturmak için adım 1'de sentezlenen 5 peptit fragmanında birleştirme reaksiyonu gerçekleştirin. Birleştirme reaksiyonu kimyasal veya biyolojik birleştirme ajanları kullanılarak gerçekleştirilebilir ve spesifik yöntem gerçek ihtiyaçlara göre seçilebilir.

Birleştirme reaksiyonunda, her bir fragmanın amino grubunu bir sonraki fragmanın karboksil grubuna bağlamak gerekir. Bunu başarmak için genellikle DIC veya BOP gibi yoğuşma ajanlarının kullanılması gerekir. Bu yoğuşma maddeleri, amino ve karboksil grupları arasındaki reaksiyonu teşvik ederek peptit bağları oluşturabilir. Birleştirme reaksiyonunda, reaksiyonun düzgün ilerlemesini sağlamak için sıcaklık, pH değeri ve reaksiyon süresi gibi reaksiyon koşullarının kontrol edilmesine de dikkat edilmelidir.

3. Saflaştırma ve tanımlama

Sentezlenen liraglutid, ürünün saflığını ve kalitesini sağlamak için saflaştırılmalı ve tanımlanmalıdır. Saflaştırma genellikle yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) veya elektroforez gibi yöntemler kullanılarak gerçekleştirilir, ardından kütle spektrometrisi, nükleer manyetik rezonans ve diğer yöntemler kullanılarak tanımlama yapılır. Bu yollarla, sentezlenen ürünün moleküler ağırlığının ve dizisinin beklentilerle tutarlı olması ve safsızlık veya yan ürün kalıntıları olmaması sağlanabilir.

4. Diğer değişiklikler

Yukarıdaki adımlara ek olarak, bazen koruyucu grupların eklenmesi veya kaldırılması gibi başka değişiklikler gereklidir. Bu adımlar da önemlidir, çünkü peptitlerdeki aktif grupları yok edilmeden koruyabilir veya yan reaksiyonlar meydana gelir, bu da sentezlenen sentezlerin kalitesini ve verimini artırır.Liraglutid tozu.

Yukarıdakiler, liraglutidin sentezlenmesi için ana kimyasal yöntemlerdir, ancak elbette, pratik operasyonda bazı ayrıntılar ve tekniklerin not edilmesi gerekir. Örneğin, uygun çözücü sistemini seçmek, sıcaklığı ve pH'ı kontrol etmek ve uygun katalizörlerin kullanılması sentez verimliliğini ve ürün kalitesini etkileyebilir. Bu nedenle, pratik operasyonda, belirli koşullara göre ayarlamalar ve optimizasyonların yapılması gerekmektedir.

Liraglutid (uzun etkili bir GLP-1 reseptör agonisti) diyabet tedavisinde önemli bir rol oynar. Kalite kontrol edilebilirliğini sağlamak için, bilimsel ve titiz analitik yöntemler oluşturmak ve bu yöntemlerin güvenilirliğini sağlamak için sistematik doğrulama yapmak gerekir. Aşağıdaki analiz üç açıdan gerçekleştirilmiştir: doğrulama öğeleri, doğrulama yöntemleri ve anahtar kontrol noktaları.

Temel doğrulama öğeleri ve teknik gereksinimler

Özgüllük

Amaç: Yöntemin liraglutid'i kirliliklerden, bozulma ürünlerinden ve eksipiyanlardan ayırt edebileceğini kanıtlamak.

Uygulama Stratejisi:

Kromatografi: HPLC-UV veya UPLC-MS kullanın. Zorla bozunma testleri (yüksek sıcaklık, ışık maruziyeti, asit-baz hidroliz gibi), bozunma ürünleri üretir ve ana pikin ve safsızlık zirvesinin ayırma derecesini (1.5'e eşit veya eşit) doğrular. Örneğin, apoE-/- fare modelinin çalışmasında, liraglutid oksitlendikten sonra, bozunma ürünlerinin (formik asit eklentileri gibi), bozulma ürünlerinin ana zirveden ayırma etkisini sağlamak için kromatografik analizle doğrulanması gerekir.

Spektroskopi: Ana pik ve safsızlıkların UV spektrumlarını karşılaştırmak ve piklerin saflığını doğrulamak için bir PDA detektörü kullanın.

Boş kontrol: liraglutid olmayan numuneleri kullanarak yanlış pozitif sinyallerin yokluğunu doğrulayın (eksipiyan çözümleri gibi).

 

Kesinlik

Amaç: Ölçülen sonuçların gerçek değere yakın olmasını ve geri kazanım oranının% 98 - 102 içinde kontrol edildiğinden emin olmak.

Uygulama Stratejisi:

Standart Ekleme Kurtarma Testi: Bilinen liraglutid içeriğine sahip bir numuneye bilinen bir miktar referans madde ekleyin ve kurtarma oranını ölçün. Örneğin, formülasyonun analizinde, boş eksipiyan çözeltisine 0.5 mg/ml, 1.0 mg/ml ve 1.5 mg/ml liraglutid ekleyin, her konsantrasyonu 3 kez tekrarlayın ve ortalama iyileşme oranını hesaplayın.

Karşılaştırma yöntemi: Klasik yöntemlerle (titrasyon gibi) veya doğrulanmış yöntemlerle (farmakopesi yöntemleri gibi) karşılaştırın ve sonuç sapması%2'den veya%2'ye eşit olmalıdır.

 

Kesinlik

Amaç: Tekrarlanan ölçüm sonuçlarının yakınlık derecesini değerlendirmek, RSD%2'ye eşit veya eşittir.

Uygulama Stratejisi:

Tekrarlanabilirlik: Aynı analist, aynı enstrüman ve aynı numune grubu tarafından aynı örneğin ardışık 6 ölçümünü yapın ve RSD'yi hesaplayın.

Ara Hassasiyet: Farklı analistler, farklı enstrümanlar ve farklı tarihler tarafından aynı numune grubunu belirleyerek RSD'yi hesaplayın. Örneğin, liraglutid içeriğinin belirlenmesinde, tekrarlanabilirlik RSD%1,5'ten daha az veya eşit olmalı ve ara hassas RSD%2.0'a eşit veya eşit olmalıdır.

Tekrarlanabilirlik: Birden fazla laboratuvar tarafından işbirlikçi doğrulama (farmakopesi standart yöntemleri gibi), RSD rehberlik ilkelerine uymalıdır.

 

Tespit sınırı ve nicelik sınırı

Amaç: Yöntemin liraglutid tespit edebileceği ve ölçebileceği minimum konsantrasyonu belirlemek.

Uygulama Stratejisi:

Sinyal-gürültü oranı yöntemi: LOD'u 3: 1 sinyal-gürültü oranı ile belirleyin ve 10: 1 sinyal / gürültü oranı ile LOQ'yu belirleyin. Örneğin, HPLC-UV yönteminde, liraglutid LOD'u 0.01 ug/ml kadar düşük olabilir ve LOQ 0.05 ug/mL'dir.

Standart eğri yöntemi: Düşük konsantrasyon standart maddelerinin (0.1 ug/ml - 1} ug/ml gibi) yanıt sinyallerini kullanarak LOD ve LOQ'yu hesaplayın.

 

Doğrusallık

Amaç: Yanıt sinyalinin konsantrasyonla orantılı olduğunu kanıtlamak için, R² 0.999'dan daha büyük veya eşittir.

Uygulama Stratejisi:

Gradyan Konsantrasyon Testi: Standart çözeltilerin 5-7 konsantrasyon gradyanlarını (0.1 mg/ml - 2.0 mg/ml gibi) hazırlayın, tepe alanı veya tepki değerini ölçün ve standart eğriyi çizin.

Kalıntı analiz: artıkların rastgele dağıtılıp dağıtılmadığını ve sistematik bir sapma olup olmadığını kontrol edin.

 

Menzil

Amaç: Yöntemin geçerli konsantrasyon aralığını belirlemek için, genellikle LOQ'nun% 120'i doğrusallığın üst sınırına kadar.

Uygulama Stratejisi:

İçerik Tespiti: Aralık, etiketli miktarın% 80 - 120 olarak ayarlanır. Örneğin, liraglutid formülasyonunun içerik belirleme aralığı 0.4 mg/ml - 1.2 mg/ml olmalıdır. Kafa Kontrolü: ICH Q3D kılavuzuna göre, safsızlık sınır aralığını belirleyin (örn.,%0,5'ten daha düşük veya eşit olan tek safsızlık, toplam safsızlık%2.0'a eşit veya eşit).

Doğrulama belgeleri ve veri yönetimi

01

Doğrulama Planı ve Rapor

Doğrulama öğelerini, yöntemleri, kabul standartlarını ve anormal kullanım prosedürlerini açıkça tanımlayın. Örneğin, hassas RSD sınırı aşarsa, cihaz hatalarını veya operasyonel hataları araştırmak gerekir.

İzlenebilirliği sağlamak için orijinal verileri (kromatogramlar, standart eğriler, kurtarma hızı hesaplama tabloları gibi) kaydedin.

02

Kararlılık göstergesi yöntemi geliştirme

Zorunlu bozunma testleri için, gerçek depolama koşullarını simüle etmek için oksidasyon, ışık maruziyeti, hidroliz vb. Örneğin, liraglutid 48 saat boyunca 60 dereceye yerleştirilmiş, bozulma oranı, yöntemin bozulma ürünlerini tespit etme yeteneğini doğrulamak için% 10'dan büyük veya% 10'a eşit olmalıdır.

03

Düzenleyici uyumluluk

ICH Q2 (R2), USP'yi takip edin<1225>ve doğrulama öğelerinin özgüllük ve doğruluk gibi temel göstergeleri kapsadığını sağlamak için Çin GMP yönergeleri.

Elemental safsızlık analizi için ICH Q3D ve USP'ye uymalıdır<233>AS, CD ve PB gibi 1 sınıf elemanların sınırlarını kontrol eden gereksinimler.

Popüler Etiketler: Liraglutide Toz CAS 204656-20-2, Tedarikçiler, Üreticiler, Fabrika, Toptan, Satın Al, Fiyat, Toplu, Satılık