L-tioglutamik asitkaralahana, hardal yeşilliği ve brokoli gibi grannymonda sebzelerinde glukozinolat benzeri öncülerden dönüştürülen doğal bir ürün bileşiğidir. Çeşitli sağlık etkileri vardır ve kanser, kardiyovasküler hastalık ve diyabet gibi kronik hastalıkları önlemek için yaygın olarak kullanılır. Lahana, karnabahar ve lahana gibi turpgil bitkilerinde yaygın olarak bulunur. Antikanser, antiinflamatuar, antioksidatif, nöroprotektif, vb. gibi pek çok farmakolojik aktiviteye sahiptir. Bu nedenle, L-tioglutamik asidin sentetik yöntemi çok dikkat çekmiştir.
Şu anda, L-tioglutamik asit sentezleme yöntemleri iki kategoriye ayrılabilir: biyolojik fermantasyon ve kimyasal sentez. Bu iki yöntem aşağıda ayrıntılı olarak açıklanmaktadır.
L-Sulforaphane biyolojik fermantasyon yöntemi:
Biyolojik fermantasyon yöntemi, bileşiklerin mikroorganizmalarla sentezlenmesi yöntemidir. Bakteri suşlarının taranması ve kültür koşullarının optimizasyonu yoluyla mikroorganizmalar, fermantasyon işlemi sırasında L-tioglutamik asit üretebilir. Şimdi, Escherichia coli, Streptococcus thermophilus ve benzeri gibi birçok suşun L-tioglutamik asidi sentezleyebildiği bulunmuştur. Bunlar arasında, Escherichia coli tarafından temsil edilen suşlarla L-tioglutamik asit sentezleme yöntemi en yaygın olanıdır. Belirli adımlar aşağıdaki gibidir:
1. Escherichia coli gibi L-tioglutamat üreten suşları topraktan veya bitki dokusundan izole edin;
2. Escherichia coli'yi yetiştirmek için sıcaklık, pH değeri, kültür süresi vb. gibi uygun ortam ve kültür koşullarını benimseyin;
3. Escherichia coli fermantasyon et suyunu toplayın, belirli işleme ve saflaştırma işlemlerini gerçekleştirin ve L-tioglutamik asit elde edin.
L-Sülforaphane kimyasal sentez yöntemi:
Kimyasal sentez yöntemi, L-tioglutamik asidi farklı sentetik yollarla sentezlemek için kimyasal moleküler reaksiyon yöntemini kullanmaktır. Şu anda, kimyasal sentez yöntemleri esas olarak dört türe ayrılmıştır: kolin tuzu yöntemi, sülfüril klorür yöntemi, karbonil indirgeme yöntemi ve agaroz sülfat yöntemi.
1. Kolin tuzu yöntemi:
Bu yöntem yaygın olarak kullanılan sentetik yöntemlerden biridir. Aşağıdaki gibi ilerleyin:
① İlk olarak, L-metiyonin ve kolin, L-tioglutamik asidin nadir bir nitrojen ikamesini oluşturmak üzere asidik koşullar altında reaksiyona sokulur.
② Azot ikamelerinin alkalin koşullar altında L-tioglutamik aside ısıtılması ve hidrolize edilmesi.
Bu yöntemin avantajı, reaksiyonun basit ve ustalaşması kolay, ancak verimin düşük olmasıdır.
2. Sülfonil klorür yöntemi:
Bu yöntem, L-tioglutamik asidi sentezlemek için elektrofilik ikame reaksiyonunu kullanır. Aşağıdaki gibi ilerleyin:
① L-tioglutamik asit sülfinat elde etmek için L-metiyonin ve sülfonil klorürün alkali koşullar altında reaksiyonu.
② Sülfinat, L-tioglutamik asit üretmek için alkalin koşullar altında hidrolize edilir.
Bu yöntemin avantajı, reaksiyonun kontrolünün kolay olması ve verimin yüksek olması, ancak toksik sülfonil klorür kullanımını gerektirmesidir.
3. Karbonil indirgeme yöntemi:
Yöntem, L-tioglutamik asidi sentezlemek için indirgeme reaksiyonunu kullanmaktır. Aşağıdaki gibi ilerleyin:
①L-metiyonin, aynı anda piridin pirimidin-2-en-4-bir ve pirimidin pirimidin-2-en-4-bir-5-sülfat oluşturmak için asetonimin ile reaksiyona girer
②Pirimidin pirimidin-2-en-4-bir-5-sülfat indirgenerek L-tioglutamik asit elde edilir.
4. Agaroz sülfat yöntemi: Bu yöntem, L-tioglutamik asit oluşturmak için L-metiyonin ve agaroz sülfatın asidik koşullar altında reaksiyona sokulmasıdır. Sülfatın iyi katalitik aktivitesi nedeniyle, reaksiyon verimliliği ve seçiciliği iyileştirilir. Daha yüksek, ancak çalıştırılması daha hantal.
Bilimsel araştırmalarda L-sulforaphane'nin tespiti çok önemlidir. Bunlar arasında agaroz sülfat yöntemi klasik tespit yöntemlerinden biridir. Agaroz sülfat yöntemi ve adımları aşağıda ayrıntılı olarak açıklanacaktır.
deneysel prensip
Agaroz sülfat yöntemi, L-tiogalaktopirin ve asidik koşullar altında oluşan bir tuz olan baryum sülfattan oluşan sarı bir kompleksin, L-'yi ayırmak için iskele olarak agaroz kullanılarak oluşturulmasına dayanır. Yöntem, asidik koşullar altında, baryum sülfat ve L-sülforafanın reaksiyonuyla oluşan sarı kompleksin suda kolayca çözünmemesi ve L-sülforafanı ayırmak ve tespit etmek için agarozda çökelmesi gerçeğine dayanmaktadır.
Deneysel adımlar:
Adım 1: Agaroz-baryum sülfat süspansiyonunu hazırlayın
Uygun miktarda agaroz ve baryum sülfat tartın, karıştırdıktan sonra belirli miktarda damıtılmış su ekleyin ve iyice karıştırın, eriyene veya eşit şekilde karışana kadar ısıtın, süspansiyonu gözenek boyutu 0.22um olan bir filtre ile süzün ve sonra 3 ila 5 dakika kaynatın. Süspansiyon 50 derecenin altına soğuduğu halde katılaşmadığında, solüsyonu bir Petri kabına dökün ve katılaşana kadar oda sıcaklığında bekletin.
Adım 2: Numune hazırlama ve işleme:
Test edilecek örneği veya standardı tartın, çözünmeye yetecek kadar {{0}.01 M sodyum pirofosfat solüsyonu ekleyin, ekstrakte etmek için karşılık gelen hacimde kloroform ekleyin, 10-15 dakika santrifüjleyin , üst tabaka sıvısını çıkarın, tortuyu toplamak için kloroformu buharlaştırın, 2 mL su ve 2 mL konsantre hidroklorik asit ekleyin, tekrar kloroform ile özütleyin, santrifüjleyin ve üst katman alındı. Üst sıvıdan 24 mL alın, 0,2 mL yüzde 2 bakır nitrat çözeltisi ve 0,4 mL yüzde 5 kurşun nitrat çözeltisi ekleyin, kloroform ile bir kez ekstrakte edin, santrifüjleyin ve test için deneysel bir numune olarak kullanılabilecek üst sıvıyı alın.
3. Adım: Yeniden analiz deneyi:
Örnekler agaroz-baryum sülfat süspansiyonuna eklendi ve 2 saat 80 derecede katılaşması için su banyosunda ısıtıldı. Numune katılaştıktan sonra, agaroz-baryum sülfat süspansiyonu oda sıcaklığına kadar soğutulur ve agaroz-baryum sülfat-numune kompleksi, sitrik asit ve amonyum tuzunun tampon koşulları altında çözülür. Son olarak, sırayla suyla durulayın ve agaroz küredeki kompleksin rengini görsel olarak inceleyin.
Adım 4: Sonuç analizi:
Standart bir eğri oluşturmak için yeniden analizden sonra süzüntünün absorbansını ölçün, böylece L-sülforafan içeriği elde edin.
Agaroz sülfat yöntemi, L-sülforafanın ayrılması ve saptanması için klasik bir yöntemdir. Bir dizi adımla L-sülforafan ayrılabilir ve içeriği tespit edilebilir. Yöntem, basitlik, yüksek hassasiyet ve doğru sonuçlar gibi avantajlara sahiptir ve gıda, kozmetik ve farmasötiklerde L-sülforafanın saptanmasında yaygın olarak kullanılmaktadır.
Özet: Bilim ve teknolojinin gelişmesiyle birlikte, L-tioglutamik asidi sentezleme yöntemi sürekli olarak optimize edilmekte ve iyileştirilmektedir. Aynı zamanda biyolojik fermantasyon yöntemi ve kimyasal sentez yönteminin de kendi avantajları ve dezavantajları vardır ve hangi yöntemin kullanılacağı fiili duruma bağlıdır.