Retatrutide(bağlantı:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) kimyasal olarak sentezlenmiş uzun etkili bir GLP-1R/GIPR/GCGR polipeptit agonistidir ve yetişkinlerde tip 2 diyabet, kilo yönetimi ve alkolsüz yağlı karaciğer/alkolik olmayan steatohepatit tedavisine yöneliktir. Bu ürünün yetişkin tip 2 diyabet endikasyonu 29 Ağustos 2023 tarihinde klinik kullanım için onaylanmıştır. Ayrıca alkolsüz yağlı karaciğer/alkolik olmayan steatohepatit endikasyonlarının klinik tescili başvurusu da son inceleme aşamasındadır. Dünyada geliştirilmekte olan sekiz GLP-1R/GIPR/GCGR agonisti bulunmaktadır; bunların arasında Rita'nın Retatrutide ürünü en hızlı ilerlemeyi kaydetti ve bu yılın Haziran ayında üçüncü aşama klinik denemesini başlattı. Aynı ayda Rita, retatrutidin ikinci aşama araştırma verilerinin ADA'nın yıllık toplantısında yayınlandığını ve 24 haftada retatrutidin (1 mg, 4 mg, 8 mg veya 12 mg) ana etkinlik son noktasına ulaştığını gösterdiğini duyurdu. diyabeti olmayan obez veya fazla kilolu katılımcılar için ortalama %17,5 kilo kaybı ile değerlendirme. İkincil son noktalar arasında, 48 haftalık tedavinin sonunda ortalama %24,2'lik bir kilo kaybı elde edildi. Ayrıca peptidi yayınlanan yönteme göre laboratuvarda sentezledik. Spesifik sentez yöntemi kısaca açıklanacaktır ve spesifik adımlar bize e-posta yoluyla gönderilebilir.
Yöntem 1:
Laboratuvarda katı hal sentezi kullanılarak Retarutid'in sentezlenmesine yönelik ayrıntılı adımlar aşağıdaki gibidir:
Gerekli reaktifleri ve aletleri hazırlayın: amino asitler, diklorometan, potasyum karbonat, etoksilenmiş silika jel, asetonitril, piridin, N-metilmorfolin, diizopropiletil klorür kaynağı, trifloroasetik asit, DIPEA, Boc korumalı amino asitler ve diğer reaktiflerin yanı sıra manyetik karıştırıcılar dahil , döner buharlaştırıcılar ve diğer aletler.
(1) Boc korumalı amino asitlerin sentezi: Gerekli amino asitleri diklorometan içinde çözün, potasyum karbonat tozu ekleyin, eşit şekilde karıştırın, etoksilenmiş silika jeli ekleyin, karıştırmaya devam edin ve ardından Boc korumalı amino asitler elde etmek için piridin ve N-metilmorfolin ekleyin.
(2) Katı faz sentezi: Asetonitril, diizopropiletil klorür kaynağı ve trifloroasetik asidi birlikte karıştırın, eşit şekilde karıştırın, hazırlanan Boc korumalı amino asitleri ekleyin ve katı faz sentez ürününü elde etmek için karıştırmaya devam edin.
(3) Korumayı kaldırma grubu: Katı faz sentezini diklorometan içinde çözün, trifloroasetik asit ekleyin, eşit şekilde karıştırın ve ardından DIPEA ekleyin. Koruması kaldırılmış katı faz sentezini elde etmek için karıştırmaya devam edin.
(4) Saflaştırma: Koruması kaldırılmış katı faz sentezini suda çözün, pH'ı sodyum hidroksit çözeltisiyle yaklaşık 9.0'ye ayarlayın, ardından pH'ı asetik asitle yaklaşık 5.0'ye ayarlayın ve son olarak saf ürünü eterle çökeltin.
Yöntem 2:
Laboratuvarda sıvı faz sentezi kullanılarak Retarutid'in sentezlenmesine yönelik ayrıntılı adımlar aşağıdaki gibidir:
Gerekli reaktifleri ve aletleri hazırlayın: arginin, glisin, asetik anhidrit, trietilamin, potasyum karbonat, diklorometan, metanol, piridin, N-metilmorfolin, asetik anhidrit, sodyum asetat ve diğer reaktiflerin yanı sıra karıştırıcılar, ayırma hunileri gibi aletler dahil. vakum pompaları, fırınlar ve kromatografik kolonlar.
(1) Arjinin ve glisini uygun miktarda diklorometan içinde çözün, uygun miktarda asetik anhidrit ve trietilamin ekleyin ve bir karıştırıcı altında eşit şekilde karıştırın.
(2) Çözünmüş karışımı bir fırına aktarın ve amino asit kalıntılarını asetillemek için 80 derece C'de 1 saat ısıtın.
(3) Sodyum asetat oluşturmak üzere çözeltideki asetik asidi nötralize etmek için reaksiyona giren çözeltiyi potasyum karbonat tozuyla nötralize edin ve ardından üretilen peptidi diklorometanla ekstrakte edin.
(4) Ekstrakte edilen peptid solüsyonunu metanolle yıkayın ve ham peptidi elde etmek için bir vakum pompasıyla filtreleyin.
(5) Ham peptidi uygun miktarda piridin ve N-metilmorfolin içinde çözün, uygun miktarda asetik anhidrit ve sodyum asetat ekleyin ve bir karıştırıcı altında eşit şekilde karıştırın.
(5) Reaksiyona giren çözeltiyi bir vakum pompasıyla filtreleyin, filtre kekini metanolle yıkayın ve ardından nihai Restarutid'i elde etmek için bir vakum pompasıyla filtreleyin.
Yöntem 3:
Laboratuvarda kimyasal yöntemler kullanılarak Retarutid'in sentezlenmesine yönelik ayrıntılı adımlar aşağıdaki gibidir:
Gerekli reaktifleri ve aletleri hazırlayın: arginin, glisin, asetik anhidrit, trietilamin, potasyum karbonat, diklorometan, metanol, piridin, N-metilmorfolin, asetik anhidrit, sodyum asetat ve diğer reaktiflerin yanı sıra karıştırıcılar, ayırma hunileri gibi aletler dahil. vakum pompaları, fırınlar ve kromatografik kolonlar.
(1) Arjinin ve glisini uygun miktarda diklorometan içinde çözün, uygun miktarda asetik anhidrit ve trietilamin ekleyin ve bir karıştırıcı altında eşit şekilde karıştırın.
(2) Çözünmüş karışımı bir fırına aktarın ve amino asit kalıntılarını asetillemek için 80 derece C'de 1 saat ısıtın.
(3) Sodyum asetat oluşturmak üzere çözeltideki asetik asidi nötralize etmek için reaksiyona giren çözeltiyi potasyum karbonat tozuyla nötralize edin ve ardından üretilen peptidi diklorometanla ekstrakte edin.
(4) Ekstrakte edilen peptid solüsyonunu metanolle yıkayın ve ham peptidi elde etmek için bir vakum pompasıyla filtreleyin.
(5) Ham peptidi uygun miktarda piridin ve N-metilmorfolin içinde çözün, uygun miktarda asetik anhidrit ve sodyum asetat ekleyin ve bir karıştırıcı altında eşit şekilde karıştırın.
(6) Reaksiyona giren çözeltiyi bir vakum pompasıyla filtreleyin, filtre kekini metanolle yıkayın ve ardından son Restarutid'i elde etmek için bir vakum pompasıyla filtreleyin.
Hedef molekülü elde etmek için birden fazla organik sentez reaksiyonu gereklidir. Ek olarak, bu yöntem birden fazla organik reaktif ve karmaşık çalışma koşulları kullandığından Rotarutide'in laboratuvardaki kimyasal sentezi genellikle büyük ölçekli üretim veya endüstriyel uygulamalar için uygun değildir. Büyük ölçekli üretim veya endüstriyel uygulamalar için daha yaygın olarak kullanılan yöntem, laboratuvar ölçeğinde nispeten küçük, kullanımı nispeten basit ve küçük miktarlarda ürün hazırlamak için uygun olan biyosentez veya sıvı faz sentezi gibi sentez yöntemleri yoluyla Rotarutid hazırlamaktır. . Bu yöntemlerle elde edilen Retarutid, yapı ve biyolojik aktivite açısından kimyasal yöntemlerle sentezlenen Retarutid'e benzer veya benzerdir ancak daha yüksek verim ve daha kolay hazırlanma avantajlarına sahiptir. Aynı zamanda daha iyi sanayileşme potansiyeline ve daha geniş uygulama olanaklarına da sahiptirler.
Yöntem 4:
Laboratuvarda biyolojik yöntemler kullanılarak Retarutid'in sentezlenmesine yönelik ayrıntılı adımlar aşağıdaki gibidir:
Gerekli genlerin ve reaktiflerin hazırlanması: Retatrutide genini içeren plazmidleri gen kütüphanesinden edinin, plazmidleri alıcı hücrelerle (Escherichia coli gibi) dönüştürün ve Retatrutide genini içeren mühendislik bakterileri elde edin.
(1) Mühendislik bakterilerinin yetiştirilmesi: Uygun sıcaklık, pH ve iyon konsantrasyonu koşulları altında, mühendislik bakterilerini yetiştirmek için bir kültür ortamı kullanın ve bunların büyük miktarlarda çoğalmasını sağlayın.
(2) Retarutidin Ekstraksiyonu: Yetiştirilen mühendislik bakterileri bir kırıcı kullanılarak ezilir ve ham ürünü elde etmek için ultrafiltrasyon ve sedimantasyon gibi yöntemler kullanılarak hücre parçaları Retarutid'den ayrılır.
(3) Retarutidin Saflaştırılması: Ham Retarutid, yüksek saflıkta Retarutid elde etmek için kromatografi teknolojisi kullanılarak saflaştırılır.
Rotarutide'in tespiti ve tanımlanması: Saflaştırılmış Rotarutide'in yapısını tespit etmek ve tanımlamak için yüksek performanslı sıvı kromatografisi, kütle spektrometrisi, nükleer manyetik rezonans ve diğer teknikleri kullanın.
Laboratuvarda Retarutid'in biyolojik sentezine yönelik kimyasal reaksiyon denklemi, esas olarak iki adımı içeren gen ekspresyon süreci sırasındaki kimyasal reaksiyonları içerir: transkripsiyon ve translasyon.
Transkripsiyon: RNA polimerazın katılımını gerektiren RNA şeritlerini sentezlemek için bir ipliği şablon olarak kullanan çift sarmallı DNA açılır. Reaksiyon denklemi aşağıdaki gibidir:
Çift sarmallı DNA: DNApol → mRNA+DNApol
Çeviri: Ribozomlar, amino asitlerin ve enerjinin katılımını gerektiren bir süreç olan peptid zincirlerini sentezlemek için mRNA'ya bağlanır. Reaksiyon denklemi aşağıdaki gibidir:
Ribozom+mRNA → Peptit zinciri+GSYİH+Pi+H2O
Peptit zinciri+ATP → Peptit zinciri+AMP+PPi
Bunların arasında DNApol, DNA polimerazı temsil eder; MRNA, haberci RNA'yı temsil eder; Ribozomlar ribozomları temsil eder; Peptit zincirleri polipeptit zincirlerini temsil eder; GSYİH guanozin difosfatı temsil eder; Pi, inorganik fosforik asidi temsil eder; H2O suyu temsil eder; ATP, adenosin trifosfatı temsil eder; AMP, adenozin monofosfatı temsil eder; PPi inorganik pirofosfatı temsil eder. Bu reaksiyonlar, Retarutid sentezi için gerekli olan peptit zincirlerini üretir; bunlar daha sonra Retarutid elde etmek için daha sonraki aşamalarda işlenir ve değiştirilir.
Yukarıdakiler, Rotarutide'in laboratuvarda sentezi için yaygın olarak kullanılan yöntemlerdir ve her birinin farklı avantajları, dezavantajları ve kullanım kapsamı vardır. Laboratuvar, araştırma ve deneysel kullanıma yönelik küçük ölçekli üretim için genellikle sıvı faz sentezi ve katı faz sentez yöntemlerini kullanır; Endüstriyel üretim ise pazar talebini karşılamak amacıyla büyük ölçekli üretim için biyosentez ve sıvı/katı faz üretiminin bir kombinasyonunu benimser. Bu yöntemlerin nihai ürünün kalitesini ve saflığını sağlamak için sıkı durum optimizasyonu ve süreç kontrolü gerektirdiğine dikkat edilmelidir.